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96-well plate를 이용한 DPPH free radical 소거활성 측정과 그 응용

Application and High Throughput Screening of DPPH Free Radical Scavenging Activity by Using 96-Well Plate
농약과학회지 제7권 제2호, 2003.06, 92-99 (8 pages)
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초록
96-well plate를 사용해서 DPPH free radical 소거활성의 고효율검정(high throughput screening)방법을 확립하였고, 이 방법을 이용하여 107개의 식물특정 효소저해제와 다양한 식물 추출물의 항산화활성을 조사하였다. DPPH free radical 소거활성 측정 측정을 위한 적정 시험조건은 총 반응액이 250 ㎕일 경우 100 μM의 DPPH(pH 7.8), 20분의 반응시간이었고, 이 조건하에서 ascorbate와 a-tocopherol은 농도 의존적인 항산화활성을 나타내었다. 107개의 식물 특정효소저해제 중에서 11개의 화학물질이 100 μM 농도에서 70% 이상의 항산화활성이 있었는데, 특히 ampicillin과 gallic acid는 각각 90.2%와 92.6%의 나타냈다. 또한 100개의 식물 추출물은 50 ㎍/㎖ 농도에서 70% 이상의 활성을 보이는 추출물이 11개이었는데, 그 중에서 AT-407의 활성이 90.1%로 가장 높게 나타났다. 따라서 96-well plate를 이용한 DPPH free radical 소거 활성 측정방법은 여러 가지 합성물질이나 다양한 천연물질에 대하여 보다 간편하고 신속하게 항산화활성을 측정할 수 있을 것으로 사료되었다.

A 96-well plate was applied to determine the DPPH free radical scavenging activity using 107 plant-specific enzyme inhibitors and 100 unknown plant-originated extracts. The final optimum volume was 250 ㎕ containing 100 μM DPPH ethanolic solution at pH 7.8. In this condition, the radical scavenging activities were significantly increased by two known antioxidants consisting of ascorbate and a-tocopherol in a concentration-dependent manner. Among the 107 inhibitors, ampicillin and gallic acid showed 90.2% and 92.6% antioxidant activity at 100 μM, respectively, and these results were consisted with previous findings. In the tested 100 natural materials at 50 ㎍/㎖, antioxidant activity of AT-407 resulted in the highest of 90.1%, and 10 extracts including AT-388 and AT-443 showed over 70%. Our results suggest that the use of 96-well plate for determining DPPH free radical scavenging activity would be a suitable method to select antioxidant-like substances of both synthetic compounds and natural products.

목차
요약
서론
재료 및 방법
결과 및 고찰
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