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Kim Young-Cheon (세종대학교) 안우석 (한국생명공학연구원) 차아라 (세종대학교) Jie Eun Yee (Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology) Kim Suk Weon (Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology) Hwang Byung-Ho (Asia Seed Company Limited Gyeonggi-do) 이상협 (세종대학교)
저널정보
한국식물생명공학회 Plant Biotechnology Reports Plant Biotechnology Reports 제16권 제1호
발행연도
2022.2
수록면
123 - 132 (10page)
DOI
10.1007/s11816-021-00732-y

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Broccoli, a Brassica crop, is an important vegetative crop because of its nutritional components and beneficial phytochemi- cals. Glucoraphanin (GR), a major glucosinolate (GSL) in broccoli, is converted by hydrolyzation of the endogenous enzyme, myrosinase, into sulforaphane (SR), which protects the body against a variety of chronic diseases. Despite their economic importance, biotechnological approaches for increasing GR content in Brassica species are still limited. The main objective of this study was to develop a GR-rich broccoli cultivar using the CRISPR/Cas9-mediated DNA-free genome-editing technique. It is considered that MYB28 is one of the key genes involved in the accumulation of GSL levels in broccoli. Furthermore, with increased GSL levels by introgression of MYB28 from wild species, B. villosa showed a 9?bp deletion in exon 3, leading to one amino acid substitution and the deletion of three amino acids. Therefore, we considered the 9?bp deletion to be the most significant change in GR-rich broccoli and conducted Cas9 protein and single-guide RNA transfection into broccoli protoplasts for editing the flanking sequence of the 9?bp deleted MYB28 gene. Finally, increased GR content was observed in broccoli regenerated from protoplasts with specifically edited MYB28.

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