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초록·키워드
Pseudomonas putida SM 25로부터 catechol 1,2-dioxygenase를 ammonium sulfate precipitation, DEAE-sepharose A-50 CL-6B ion exchange chromatography, phenyl-sepharose CL-4B hydrophobic chromatography 및 preparative gel permeation chromatography를 통해 정제배율 806.2배, 정제수율 10.6%로 부분정제하였다. Phenol, benzoate, catechol 및 salicylate가 효소를 유도하였으며, 그 중 5 mM phenol이 가장 좋은 결과를 나타내었다. 이 효소는 catechol에 대해서는 우수한 효소 활성을 보였으나, 4-methylcatechol, pyrogallol 및 protocatechuate에 대해서는 거의 활성을 보이지 않았으며, catechol에 대한 Km 값은 7.8 M이었다. 이 효소는 pH 7.5, 40°C에서 가장 높은 활성을 보였다. 이 효소는 pH 7.0~11.0에서 안정하였으며, 열에 불안정하여 50°C에서 15분 내에 활성을 완전히 잃었고, thiol기 저해제에 의한 영향은 받지 않았다. 이 효소에 의한 catechol의 반응산물을 UV-visible spectroscopy, HPLC-diode array spectroscopy, GC-mass spectrometry로 분석한 결과 cis,cis-muconic acid로 확인되었다.
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