한국산 꿀벌에서 Deformed Wing Virus의 발견과 Real-Time PCR 검출법의 확립

이혜민; 이도부; 한상훈; 이명렬; 임윤규; 윤병수

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자료유형: 학술저널

저자정보: 이혜민 이도부 한상훈 이명렬 임윤규 윤병수

저널정보: 한국양봉학회 Journal of Apiculture 韓國養蜂學會誌 제20권 제2호

발행연도: 2005.12

수록면: 85 - 94 (10page)

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본 연구에서는 꿀벌 바이러스 질병 중의 하나인 Deformed Wing Virus(DWV)를 날개가 기형인 국내산 꿀벌 시료로부터 PCR detection 방법으로 확인하고, 이를 바탕으로 Real-Time PCR 진단법을 확립하고자 하였다.
DWV는 현재까지 국내에서 검출에 관한 보고서가 발견할 수 없었으며, 본 연구에서 새로이 밝혀진 479 bp의 염기서열은 기존의 DWV(GenBank AY292384)와 비교하였을 때 95.7%의 상동성을 가지는 것으로 확인되었다.
또한, Real-Time PCR을 사용한 바이러스 유전자의 검출법을 확립하기 위해 특이 primer인 DWV-SF/ DWV-SR를 사용하였으며, 이는 실험을 통해 확립된 표준조건 94℃, 10 min pre-denaturation/94℃, 30s ; 59.7℃, 30s ; 72℃, 30s(40 cycles)/ 72℃, 5 min post-poly merization에서 수행되었고, melting point analysis를 위해 55℃에서 94℃가지 온도를 상승시켰다.
PCR 검출에 사용된 template는 DWV clone DNA를 사용하였으며, 이는 10 ng-1 fg의 범위 내에서 기질의 양파 C<SUB>T</SUB> 값이 정확한 상관관계가 있는 것(R²-0.9994)으로 확인되어 정량이 가능함을 보여주었다. 또한, 다른 꿀벌 질병의 원인균들을 인공적으로 오염시킨 시료, 즉, 꿀벌 세균성 질병인 미국부저병의 원인균 P. larvae ATCC 9545, ATCC 25747, ATCC 25748과 유럽부저병 원인균인 Melissococcus pluton, 그 밖의 Bacillus subtilis, Paenibacillus alvei, 꿀벌 진균성 질병인 백묵병의 원인균인 Ascosphaera apis와 석고병 원인균인 Aspergillus flavus를 각기 동일한 비율로 혼합한 것, 80 ng과 DWV clone DNA 10 ng-1 fg을 각기 혼합한 시료에서 기질의 양과 C<SUB>T</SUB> 값의 정확한 상관관계를 보여주었다. 이는 특히 primer의 민감도를 증명하는 결과로 오염된 시료에서도 DWV의 정확한 검출과 정량이 가능함을 보여준다.

#Deformed wing virus(DWV) #Real-Time PCR

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