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이 논문의 연구 히스토리 (3)
2008
Proteasome inhibitor MG-132 induces apoptosis in human acute leukemia Jurkat T cells through mitochondria-dependent caspase pathway that is negatively modulated in the presence of caspase-12 inhibitor (z-ATAD-fmk) or caspase-4 inhibitor (z-LEVD-fmk)
Hae Sun Pa
,
k
,
Do Youn Jun
외 1명
한국생명과학회 심포지움
2008.10
학술대회자료
Proteasome Inhibitor MG-132 Induces Apoptosis in Human Acute Leukemia Jurkat T Cells through Mitochondria-Dependent Caspase Pathway That is Negatively Modulated in the Presence of Caspase-12 Inhibitor (z-ATAD-fmk) or Caspase-4 Inhibitor (z-LEVD-fmk)
Hae Sun Pa
,
k
,
Do Youn Jun
외 1명
한국생명과학회 심포지움
2008.10
학술대회자료
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L-arginine 구조유사체인 L-canavanine의 인체 급성백혈병 Jurkat T 세포에 대한 apoptosis 유도활성이 단백질 티로신키나아제 p56<SUP>lck</SUP>에 어떻게 조절되는지를 규명하기 위해 p56<SUP>lck</SUP>를 발현하는 Jurkat T 세포주 E6.1과 p56<SUP>lck</SUP>-결손 Jurkat T 세포주 JCaM1.6에 있어서 L-canavanine의 세포독성, L-canavanine에 의해 유도되는 apoptotic DNA fragmentation 및 apoptotic sub-G1 peak를 비교하여 본 바, p56<SUP>lck</SUP>-negative JCaM1.6 세포가 p56<SUP>lck</SUP>-positive E6.1 세포에 비해 L-canavanine의 apoptotis 유도활성에 훨씬 더 민감한 것으로 나타났다. 이러한 p56lck-negative JCaM1.6 세포의 민감성은 JCaM1.6 세포에 p56<SUP>lck</SUP> 유전자를 transfection시켜 발현시키면 현저히 감소되었다. L-Canavanine에 의해 유도되는 apoptosis관련 현상들을 p56<SUP>lck</SUP>-stable transfectant인 JCaM1.6/lck 세포와 empty vector-transfectant 인 p56<SUP>lck</SUP>-negaive JCaM1.6/vector 세포에서 Western blot analysis로 비교한 결과, L-canavanine에 의해 유도되는 mitochondrial membrane potential (Δψm)의 감소, caspase-9, -8, -7 및 -3의 활성화, 그리고 PARP 및 PLCγ-1의 분해가 JCaM1.6/vector 세포에 비해 JCaM1.6/lck 세포에서 더 약하게 나타났다. JCaM1.6/lck 세포를 2.5 mM L-canavanine으로 처리한 다음 세포 내 p56<SUP>lck</SUP> kinase 활성의 변화를 α-casein을 기질로 하여 시간 별로 측정한 결과, L-canavanine의 처리 후 15분만에 p56<SUP>lck</SUP> kinase의 활성이 약 1.6배 증가되었으며 이후 6시간 동안은 약 1.3～1.4 배정도 증가된 수준으로 kinase 활성이 유지되는 것으로 확인되었다. L-Canavanine에 의한 apoptosis의 개시에 Fas/FasL 상호작용이 관련되는지를 규명하기 위해 FADD-negative Jurkat T 세포주 I2.1, caspase-8-negative Jurkat T 세포주 I9.2 및 wild-type Jurkat T 세포주 A3에 대한 L-canavanine의 세포독성을 비교한 결과, A3와 I2.1 세포의 경우는 L-canavanine의 세포독성이 동일하게 나타났고, 특히 caspase-8가 결손된 I9.2 세포의 경우는 L-canavanine의 세포독성에 대한 민감성이 A3와 I2.1 세포에 비해 단지 미약하게만 완화되는 것으로 나타나, L-canavanine의한 apoptosis에는 Fas/FasL 상호작용이 관련되어 있지 않으며, 또한 caspase-8의 역할이 필수적이지 않음을 시사하였다. Jurkat T 세포에 있어서 L-canavanie에 의해 유도되는 sub-G1 peak 및 caspases 활성화에 미치는 pan-caspase inhibitor (z-VAD-fmk), caspase-9 inhibitor (z-LEHD-fmk), caspase-3 inhibitor (z-DEVD-fmk), caspase-4 inhibitor (z-LEVD-fmk) 및 caspase-12 inhibitor (z-ATAD-fmk)의 영향을 조사한 결과, L-canavanie에 의한 apoptosis는 Δψm의 감소, caspase-9 및 caspase -3의 활성화에 뒤따른 caspase-8 및 caspase-7의 활성화, 그리고 PARP의 분해의 순서로 유도되는 것으로 나타났으며, 아울러 caspase-9의 활성화와 함께 caspase-12의 활성화가 L-canavanine 처리에 따른 caspase-3의 활성화에 요구되는 것으로 확인되었다. 결론적으로, L-canavanine 처리에 의한 Jurkat T 세포의 apoptosis는 Δψm 감소, caspase-9, caspase-3 및 caspase-7의 활성화에 의해 유도되며, 이들 apoptosis 현상들은 p56<SUP>lck</SUP>에 의해 negative regulation되었다.
목차
Introduction
Materials and Methods
Results and Discussion
Acknowledgement
References
초록
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