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Sung Ae Oh (충북대학교) Mi Suk Kim (충북대학교) So Young Jang (충북대학교) Sang Jong Kim (서울대학교) Jae In Lee (보건환경연구원) Gyu Cheol Lee (수돗물분석연구센터) Chan Hee Lee (충북대학교)
저널정보
대한미생물학회 JOURNAL OF BACTERIOLOGY AND VIROLOGY JOURNAL OF BACTERIOLOGY AND VIROLOGY Vol.39 No.1
발행연도
2009.3
수록면
41 - 51 (11page)

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Human enteric viruses are one of the major causes of acute gastroenteritis outbreaks. A rapid and precise detection of virus is critical for prompt diagnosis. For this purpose, nucleic acid-based techniques such as reverse transcription (RT)-PCR have been developed. Although RT-PCR is a rapid, specific and sensitive method to detect virus, many steps or reactions are required, especially when various types of viruses are targeted. In this study, we developed a quick and effective method to detect human enteric viruses with a few reactions. Our candidate viruses were as follows: one DNA virus (adenovirus: AdV) and seven RNA viruses including poliovirus (PV), coxsackievirus A (CoxA) and B (CoxB), human rotavirus (HRV), hepatitis A virus (HAV), norovirus (NorV), and astrovirus (AstV). With this amount of samples, theoretically, a total of fifteen biomolecular reactions have to be performed, which include seven RT reactions and eight subsequent PCR with specific primers in each case. Specific primers, enterovirus universal primers, and random primers were applied independently to compare the outcomes of RT and PCR steps in each viral sample. We found that random 9-mer is ideal for the RT reactions of RNA viruses with negligible differences in sensitivity and specificity of viral detection except HRV. Hence, HRV cDNA generated by HRV-specific primer and AdV DNA were amplified in a single tube by duplex PCR. The cDNAs generated by RT using random 9-mers were divided into two reaction tubes without losing sensitivity: one duplex PCR detects enteroviruses (PV, CoxA, CoxB) and HAV, the other detects NorV and AstV. In conclusion, it is possible to detect eight enteric viruses with a substantially reduced number of reactions, which are composed of five reactions, two RT and three PCR reactions.
#Enteric viruses #RT #PCR #Multiplex

목차

서론
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결과
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