AKE의 농도별 처리가 인체 유방암 세포 MDA-MB-231의 세포사멸에 미치는 영향을 확인하기 위하여 세포 화학적인 방법인 MTT 분석, 이중 핵 염색법(Hoechst 33342/EtBr staining), FACS를 통하여 세포사멸을 관찰하였다. MTT 분석 결과, 150 μg/mL 처리 군에서 대조군에 대비하여 약 50%의 세포사멸을 나타내었으며 세포사멸이 농도 의존적으로 증가되었고(p<0.05), 이중 핵 염색법을 이용하여 세포 사의 구분 결과 능동적 세포예정사인 apoptosis가 농도 의존적으로 급격히 증가하였으며(p<0.05), 특히 150 μg/mL 처리 군에서 현저한 증가율을 나타내었다. 보다 더 명확한 세포사멸을 확인하기 위하여 FACS를 이용한 apoptosis 측정 결과, 처리군 간 크게 차이를 보이며 농도 의존적으로 증가되었다. 세포사멸관련 mRNA 유전자 발현을 관찰한 결과, 세포사멸 억제 유전자 Bcl-2는 처리농도가 증가할수록 유의적 증가를 보였으며(p<0.05), 세포사멸 유도 유전자 Bax는 유의적 감소를 나타내었다(p<0.05). 세포사멸의 지표인 Bcl-2/Bax의 비율은 농도 의존적인 감소를 나타내었으며(p<0.05), 세포사멸유도의 마지막 단계의 실행자인 caspase-3의 활성도 첨가 농도 의존적으로 증가하여 세포사멸을 유도하는 것으로 확인되었다(p<0.05). 결론적으로, AKE는 유방암 세포 MDAMB-231의 세포사멸을 유도하는 것으로 나타나 신선초의 항암효과의 가능성을 제시해주었다. 향후 in vivo 실험에서도 신선초의 항암효과에 대한 심층적 연구가 이뤄져야 할 것으로 사료된다.
We investigated the effect of Angelica keiskei ethanol (AKE) extract on cell death in MDA-MB-231 human breast cancer cells. MDA-MB-231 cells were cultured in the presence 125, 150 and 175 μg/mL concentrations of AKE for 24 hours. MTT assays demonstrated that mitochondrial dehydrogenase activities decreased in a dose-dependent manner in MDA-MB-231 cells (p<0.05). In contrast, the proportion of dual staining with Hoechst 33342/ethidium bromide(EtBr) for cell death increased in a dose-dependent manner in MDA-MB-231 cells (p<0.05). In particular, the levels of cell death caused by apoptotic program showed marked increases in the 150 and 175 μg/mL AKE groups, as revealed by flow cytometry. An apoptotic suppressor gene, Bcl-2, significantly decreased at the transcript level (p<0.05). The expression levels of proapoptotic genes, both Bax and caspase 3 significantly increased (p<0.05). Furthermore, the ratio of Bcl-2/Bax mRNA which is considered to be an important indicator of apoptosis, significantly decreased in a dose-dependent manner (p<0.05). These results taken together indicate that, the AKE extract used in this study induces cell death in MDA-MB-231 human breast cancer cells.