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초록·키워드
Leuconostoc mesenteroides NRRL B-1149 produces various glucosyltransferases for the synthesis of dextran, levan and glucose-1-phosphate using sucrose as a substrate. A sucrose phosphorylase (1149SPase) was purified from L. mesenteroides NRRL B-1149 culture by using hollow fiber filtration (30 kDa cut off), Toyopearl DEAE 650 M column chromatography and following two times of DEAE-Sephadex column chromatographies. The specific activity of the purified 1149SPase was 25.7 (U/mg) with 16% yield. The 1149SPase showed a molecular size of 56 kDa on denatured 10% SDS-PAGE. The N-terminal amino acid sequence of the enzyme was MEIQNKAM. The optimum pH and temperature of this enzyme were 6.2 ~ 6.5 and 37℃, respectively. It had an apparent K_m of 6.0 mM and K_cat of 1.62/s for sucrose. 1149SPase crystal was formed by hanging drop diffusion technique using 20 mM calcium chloride dihydrate, 100 mM sodium acetate trihydrate pH 4.6 and 30% 2-methyl-2,4-pentanediol as vaporizing and reservation solution. The 1149SPase catalyzes transferring of glucose from isomaltose or sucrose to salicin and salicyl alcohol by disproportionation reaction or acceptor reaction and synthesized two acceptor products, respectively.
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