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[학술저널]

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김상래(고신대학교) 이병욱(고신대학교)

UCI(KEPA) : I410-ECN-0101-2018-470-002101767

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초록

인간 rotavirus는 영아에게 급성 설사를 일으키는 병원체의 하나이다. 본 연구에서는 Escherichia coli의 코돈 선호도를 따라서 인간 rotavirus A (serotype 1 strain WA)의 VP8* 단백질을 일부분 암호화하도록 인공적인 유전자를 합성하였다. 합성된 VP8* 유전자는 코돈을 번역틀에 일치시키고 클로닝이 용이하도록 하기 위한 NdeI 및 HindIII 제한효소 절단 부위와 친화적 정제를 위한 6-히스티딘 암호화 서열을 C-말단에 보유하고 있다. 합성된 VP8* DNA 절편을 pT7-7 발현 벡터에 삽입하여 E. coli BL21 (DE3)로 형질전환한 후에 최종 농도 0.05 mM IPTG로 생산을 유도한 결과 예상했던 대로 19.7-kDa 크기의 VP8* 단백질이 고농도로 발현되었다. SDS-PAGE에 전개된 단백질들을 대상으로 mouse anti-rotavirus capsid antibody를 사용한 Western blotting의 결과 ~20-kDa VP8* 단백질 밴드가 관찰되었다. 인공 Vp8* 단백질이 피하 주사된 토끼의 polyclonal antibody 혈장을 이용한 조사에서도 동일한 크기의 단백질 밴드를 확인할 수 있었다. 이는 합성된 유전자가 바이러스성 질환을 통제할 항원성 백신후보의 생산 혹은 진단용 항체를 개발하기 위한 쉽고 빠른 방법을 제공할 수 있다는 의미이다.

Human rotavirus is a causative agent of acute diarrhea among children. The artificial gene encoding the truncated VP8* protein of human rotavirus A (serotype 1 strain WA) was synthesized according to the Escherichia coli codon preference. The synthetic VP8* gene also possessed the NdeI and HindIII restriction sites for the convenient in-frame cloning for translation and a 6-histidine tag at C-terminus for Ni+ affinity purification. Molecular weight of the truncated VP8* protein deduced from the nucleotide sequences of the artificial gene was a 19.7-kDa. This synthetic VP8* DNA fragment was inserted into the pT7-7 expression vector and transformed into E. coli BL21 (DE3). Transformants harboring the synthetic gene encoding the VP8* protein was induced by supplement of a final concentration of 0.05 mM ITPG at 20℃. Protein crude extract from the E. coli transformants was subjected to Western blotting with the mouse anti-rotavirus capsid antibody, showing ~20-kDa VP8* protein band. The truncated Vp8* protein band was also observed by Western blotting using the rabbit polyclonal antibody serum made against the truncated VP8* protein. This study suggested that the synthetic gene could be used as an easy way to produce the antigenic vaccine candidate for control of virus-associated diseases or to develop antibodies for diagnostic purpose.

목차

서론
재료 및 방법
결과 및 고찰
References
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