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한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 한국미생물·생명공학회지 제37권 제2호
발행연도
2009.1
수록면
105 - 109 (5page)

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Among signal transduction systems by protein phosphorylation Akt/PKB protein kinase which is one of serine/threonine kinases, is known to regulate the survival and death of the cell and glucose metabolism. Thus, Akt/PKB protein kinase has been used as one of the target proteins to find anti-cancer agents from natural products. In this study, human Akt/PKB protein kinase was expressed in Escherichia coli expression system for the mass production. Human Akt/PKB protein kinase expressed in E. coli formed inclusion body under the general condition. However, most of the expressed protein was solubilized under the culture temperature at 27℃ and 0.01-0.09 mM of IPTG for induction of the protein expression. The expressed protein was purified using Ni2+-NTA agarose column and confirmed by using anti-Akt antibody. Subsequently, the purified human Akt/PKB protein kinase was activated by in vitro phosphorylation using cellular extract containing kinases. The activated protein was confirmed to phosphorylate the specific fluorescent peptide specially designed as the artificial substrate for Akt/PKB protein kinase.

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