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저자정보
전수현 (포천중문의과대학교 의학과-차병원 여성의학연구소) 심호섭 (포천중문의과대학교 의학과-차병원 여성의학연구소) 정형민 (포천중문의과대학교 의학과-차병원 여성의학연구소) 이병천 (서울대학교 수의과대학) 이은송 (강원대학교 수의학과) 고정재 (포천중문의과대학교 의학과-차병원 여성의학연구소) 신태형 (텍사스 A ＆ M 대학교 수의과대학) 박찬 (포천중문의과대학교 의학과-차병원 여성의학연구소) 황우석 (서울대학교 수의과대학) 차광렬 (포천중문의과대학교 의학과-차병원 여성의학연구소) 임정묵 (서울대학교 농생명공학부)
저널정보
한국동물번식학회 한국수정란이식학회지 한국수정란이식학회지 제15권 제3호
발행연도
2000.1
수록면
247 - 253 (7page)

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This study was undertaken to optimize enucleation and reconstitution methods for the production of cloned mice by somatic cell nuclear transfer Outbred ICR mouse oocytes at the metapahse- II stage were retrieved from female mice superovulated by PMSG and hCG. In Experiment 1, oocytes were enucleated in medium supplemented with cytochalasin B (CCB) of 3 levels (0, 7.5 or 15 $\mu\textrm{g}$/mL), and higher rate of encleation was obtained at 7.5 and 15 $\mu\textrm{g}$/mL than at $\mu\textrm{g}$/mL. In Experiment 2, oocytes enucleated in 7.5 $\mu\textrm{g}$/mL CCB-containing medium were reconstituted with different types of somatic cell by following methods; 1) cumulus cells by direct cell injection, 2) cumulus cells by electric fusion (1.25 kV/cm, 2 pulses for each 70 $mutextrm{s}$) or 3) STO cells by the electrofusion. Electrofusion of STO cells with enucleated oocytes yielded the greatest (P<0.05) rate of reconstitution without lysis (76%) than any other combinations. Although significant decrease in the rate of somatic cell introduction was found, the electrofusion of cumulus cells yielded better rate of reconstitution than direct injection (0 vs. 18%). In Experiment 3, the duration of electric stimulation for the fusion was changed to either 50 $mutextrm{s}$ or 90 $mutextrm{s}$, but no significant improvement of reconstitution efficacy was obtained. In conclusion, this study showed that ICR mouse oocytes could be used for the production of reconstituted oocytes and a fusion method of 1.25 KV/cm with 2 pulses using 570 cell was the optimal.
#mouse #nuclear transfer #STO #fusion

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