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학술저널
저자정보
고나연 (충남대학교 농업생명과학대학 응용생물학과) 임현섭 (충남대학교 농업생명과학대학 응용생물학과) 유용만 (충남대학교 농업생명과학대학 응용생물학과) 윤영남 (충남대학교 농업생명과학대학 응용생물학과)
저널정보
한국응용곤충학회 한국응용곤충학회지 한국응용곤충학회지 제54권 제2호
발행연도
2015.1
수록면
91 - 97 (7page)

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담배가루이(Bemisia tabaci)는 외래해충으로 바이러스벡터로 작용하여, 토마토의 토마토황하잎말림병바이러스(TYLCV)를 비롯한 약 100여종의 바이러스를 매개하는 중요한 해충이다. 본 연구에서는 VIGS vector를 이용하여 담배가루이 방제를 위한 target 유전자들을 선발하기 위해 gateway system을 이용한 담배가루이 cDNA library 제작을 시도하였다. 첫 번째 방법으로 oligo d(T) primer를 사용하였을 때, 평균 약 1 kb의 insert와 $1.4{\times}10^4cfu$의 titer를 확인하였다. 그러나 insert size가 너무 커서 적절하지 않았다. 두 번째 방법으로 attB-N25 random primer를 이용하고, sonication을 6초 실시하여 다시 진행하였다. 그러나 확인되는 insert size는 다소 컸고, 몇몇은 insert가 너무 작아서 밴드가 확인 되지않았으며, $1.04{\times}10^54cfu$의 titer를 확인할 수 있었다. 세 번째 방법으로는 oligo d(T) primer를 이용하였고, sonication을 2초 실시하였다. 그 결과 300 bp~600 bp size의 insert가 확인되었으나, electro transformation을 사용한 첫번째, 두번째 방법에 비해 heat shock transformation을 사용하여 titer가 $5.2{\times}10^24cfu$로 매우 낮은 것을 확인 할 수 있었다. 결과적으로 cDNA library를 만들 때 먼저 random primer를 사용하여 First strand를 합성하여 poly A를 제거하고, 다음으로 sonication을 1초 실시하여 300~700 bp정도의 적절한 size의 insert를 생성하고, 마지막으로 electro-transformation을 실시하여 transformation 효율을 높인다면 VIGS vector에 적합한 cDNA library를 만들 수 있을 것으로 사료 된다.
#담배가루이

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Baulcombe, D / 2004 / RNA silencing in plants / Nature 431:356~363 google schola Baum, J. A. / 2007 / Control of coleopteran insect pests through RNA interference / Nature Biotech 25:1322~1326 google schola Bedford, I. D. / 1994 / Geminivirus transmission and biological characterisation of Bemisia tabaci (Gennadius) biotypes from different geographic regions / Ann. Appl. Biol 125:311~325 google schola Bettencourt, R. / 2002 / Hemolin gene silencing by ds‐RNA injected into Cecropia pupae is lethal to next generation embryos / Insect Mol. Biol 11:267~271 google schola Boykin, L. M. / 2007 / Global relationships of Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae) revealed using Bayesian analysis of mitochondrial COI DNA sequences / Mol. Phylogen. Evol 44:1306~1319 google schola

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