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학술저널
저자정보
Lee Myoung Hui (Korea Research Institute of?Bioscience and?Biotechnology) Lee Jiyoung (Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology) Choi Seung A (Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology) Kim Ye-Sol (Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology) Koo Okjae (Toolgen Inc) Choi Seung Hee (Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology) Ahn Woo Seok (Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology) Jie Eun Yee (Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology) Kim Suk Weon (Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology)
저널정보
한국식물생명공학회 Plant Biotechnology Reports Plant Biotechnology Reports 제14권 제6호
발행연도
2020.1
수록면
695 - 702 (8page)

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Nowadays, genome editing in plants has become much easier thanks to the recently developed clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR)-associated protein 9 (CRISPR?Cas9) nuclease system. However, to combine protoplast technology with the CRISPR?Cas9 system in plants, a stable and an efcient foreign DNA delivery system is essential for gene editing. In the present study, we developed an electro-transfection system for CRISPR?Cas9 ribonucleoprotein (RNP) delivery to cabbage protoplasts. Under 1000 V treatment, the frequency of initial cell division and total number of cell colonies formed were 47.7±2.5% and 52±7.5%, respectively. The total number of cell colonies formed following 1000?V treatment was 1.4 times higher than that following polyethylene glycol (PEG) treatment. However, the frequency of initial cell division and total number of cell colonies formed from protoplasts decreased with increasing voltage. Cy3?Cas9 protein delivery into the nucleus was confrmed through both electro-transfection and PEG-mediated transfection using confocal laser scanning microscopy. The frequency of insertions and deletions in the synthesized guide RNA of phytoene desaturase 1 was the highest at 3.4% following electro-transfection at 1000?V with a pulse width of 20?ms and only 1.8% following PEG-mediated transfection. These results indicate that electro-transfection is more efcient in RNP delivery to protoplast than PEG-mediated transfection in cabbage for PDS1 sgRNA delivery. Therefore, the electro-transfection system developed in the present study presents the possibility it could be used for DNA-free genome editing of other crops.
#CRISPR?Cas9?· Neon electro-transfection system?· Cabbage?· Protoplast?· PDS1

목차

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Altpeter F / 2016 / Advancing crop transformation in the era of genome editing / Plant Cell 28:1510~1520 google schola Andersson M / 2018 / Genome editing in potato via CRISPR–Cas9 ribonucleoprotein delivery / Physiol Plant 164(4):378~384 google schola Bhowmik P / 2018 / Targeted mutagenesis in wheat microspores using CRISPR/Cas9 / Scientific reports 8:6502 google schola Bortesi L / 2015 / The CRISPR/Cas9 system for plant genome editing and beyond / Biotechnol Adv 33:41~52 google schola Brees C / 2014 / A cost-effective approach to microporate mammalian cells with the neon transfection system / Anal Biochem 466:49~50 google schola

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