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저자정보
Jong-Hwan Shin (Kangwon National University) Joon-Hee Han (Kangwon National University) Hyun-Hoo Park (Kangwon National University) Teng Fu (Kangwon National University) Kyoung Su Kim (Kangwon National University)
저널정보
한국식물병리학회 The Plant Pathology Journal The Plant Pathology Journal 제35권 제6호
발행연도
2019.12
수록면
575 - 584 (10page)

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Colletotrichum acutatum is a species complex responsible for anthracnose disease in a wide range of host plants. Strain C. acutatum KC05, which was previously isolated from an infected pepper in Gangwon Province of South Korea, was reidentified as C. scovillei using combined sequence analyses of multiple genes. As a prerequisite for understanding the pathogenic development of the pepper anthracnose pathogen, we optimized the transformation system of C. scovillei KC05. Protoplast generation from young hyphae of KC05 was optimal in an enzymatic digestion using a combined treatment of 2% lysing enzyme and 0.8% driselase in 1 M NH₄Cl for 3 h incubation. Prolonged incubation for more than 3 h decreased protoplast yields. Protoplast growth of KC05 was completely inhibited for 4 days on regeneration media containing 200 μg/ml hygromycin B, indicating the viability of this antibiotic as a selection marker. To evaluate transformation efficiency, we tested polyethylene glycol-mediated protoplast transformation of KC05 using 19 different loci found throughout 10 (of 27) scaffolds, covering approximately 84.1% of the entire genome. PCR screening showed that the average transformation efficiency was about 17.1% per 100 colonies. Southern blot analyses revealed that at least one transformant per locus had single copy integration of PCR-screened positive transformants. Our results provide valuable information for a functional genomics approach to the pepper anthracnose pathogen C. scovillei.
#Colletotrichum scovillei #pepper anthracnose #protoplast #transformation

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