능성어 바이러스성신경괴사증 (VNN)의 예방 연구 :Study on prevention of viral nervous necrosis in grouper, Epinephelus septemfasciatus

김춘섭

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자료유형: 학위논문

저자정보: 김춘섭 (전남대학교, 전남대학교 일반대학원)

지도교수: 오명주

발행연도: 2013

저작권: 전남대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.

이용수3

초록· 키워드

국내에서 VNN(viral nervous necrosis)은 1990-1991년 남해안 지역의 능성어 해상가두리 양식장에서 발생된 이래로 매년 능성어 양식장에서는 여름철 고수온기에 VNN으로 인한 대량폐사가 발생하고 있다. 이에 본 연구에서는 능성어에 발생하는 VNN에 대한 예방방법을 개발하고자 하였다. 이를 위해 능성어 양식장에서 발생하는 VNN의 발생양상을 파악하여 VNN 예방을 위한 기초 자료로 활용하고자 하였으며, 병원체의 감염이력, 건강상태 모니터링 및 백신의 효능 검증 등의 목적으로 유용하게 사용될 수 있는 항체검출 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)를 능성어를 대상으로 개발하고자 하였다. 또한 항바이러스 유도물질인 polyinosinic？polycytidylic acid [Poly(I:C)]를 사용하여 VNN 예방에 활용 가능한지를 평가하였다.
2006-2008년 남해안 일대의 해상가두리에서 사육중인 능성어에서 발생하는 VNN의 발생양상을 조사한 결과, VNN은 사육 수온이 24-26℃ 범위인 8월부터 발생하기 시작하여 수온이 20-25℃ 범위인 9-10월까지 지속되었고, 성어 보다는 치어에서 폐사율이 높게 나타나는 것으로 확인되었다. 폐사되는 패턴으로는 급성으로 인한 대량 폐사와 소량으로 지속적으로 폐사되는 경우가 확인되었다. NNV(nervous necrosis virus)의 coat protein gene을 계통 분석한 결과, 능성어로부터 분리된 NNV 분리주 (GeM06BJ, GeM07BJ, GeM08BJ, GeM08JI, Yeosu08SJ)들은 모두 RGNNV type에 속하였으며, RGNNV, BFNNV, SJNNV, TPNNV type에 속하는 분리주와는 각각 84-99%, 76-77%, 67.3-68.8%, 66.4-67.7%의 상동성을 보였다. 이상의 결과로 능성어 양식장에서의 VNN은 RGNNV type의 NNV에 의해 여름철 7-9월에 (사육수온: 약 24℃) 치어뿐만 아니라 성어에서 발생하는 것으로 확인되었다.
능성어를 대상으로 ELISA법을 적용한 결과, 능성어 혈청은 -80, -20 및 4℃에서 119일간 보존하거나 10회 반복 해동하여도 능성어 IgM은 안정함이 확인되었고, 능성어의 특이 항체 반응은 20℃보다 25℃에서 항체 형성이 빠르고 항체가도 높게 나타나며 약 2달간 지속되는 것으로 확인되었다. 더욱이 NNV 감염이력에 따라 ELISA 값이 뚜렷이 구별되므로, 항체검출 ELISA법은 능성어 양식장에서 유용하게 적용되어질 수 있음을 확인되었다.
VNN의 예방 방법으로 Poly(I:C)가 활용 가능한지를 평가한 결과, Poly(I:C)를 투여한 능성어는 항바이러스 상태로 NNV 공격으로부터 (Poly(I:C) 투여후 0, 2, 4일째) 방어할 수 있음이 확인되었고, Poly(I:C) 투여한 후 NNV를 감염시켜 생산한 NNV-생존어는 NNV의 재감염으로부터 방어할 수 있어 Poly(I:C)-면역법은 VNN을 예방하는데 유용하게 사용될 수 있음이 확인되었다. 더욱이, 실험실 및 현장 조건에서 능성어는 NNV에 노출될지라도 Poly(I:C) 투여에 의해 생존할 수 있음이 확인되어, Poly(I:C)는 VNN 예방에 활용될 수 있음이 확인되었다.
이상의 연구결과를 종합하여 양식현장에서 VNN 예방방법으로서 다음의 방안을 제시하고자 한다. 첫째, 능성어에서 발생하는 VNN은 여름철 7-9월에 치어뿐만 아니라 성어에서 발생하기 때문에 위의 시기에는 VNN에 대한 각별한 주의 및 관리(고밀도 사육 금지, 면역증강제 투여, 어체가 받는 스트레스 최소화, 생사료 투여 금지)가 필요하다. 둘째, 기존의 NNV 검출방법 및 항체검출 ELISA법을 병용하여 양식 능성어의 건강상태 및 NNV의 감염이력을 모니터링 하는 동시에, VNN 예방 및 제어에 Poly(I:C)를 활용한다.

#능성어 #VNN

서 론 1
제 1장 능성어 양식장에서의 viral nervous necrosis(VNN) 발생양상
Ⅰ. 서 론 4
Ⅱ. 재료 및 방법 5
1. VNN 발생양상 5
2. 능성어 NNV 분리주의 염기서열 분석 5
Ⅲ. 결 과 6
1. VNN 발생양상 6
2. 능성어 NNV 분리주의 유전적 특성 11
Ⅳ. 고 찰 14
제 2장 능성어를 대상으로 한 항체검출 ELISA법의 적용
Ⅰ. 서 론 16
Ⅱ. 재료 및 방법 17
1. 실험어 17
2. Bovine serum albumin (BSA) 면역 및 혈청분리 17
3. 능성어 혈청의 보존 조건에 따른 IgM의 영향 18
4. 항체검출 ELISA 18
5. 능성어로부터 NNV에 대한 특이항체 검출 19
Ⅲ. 결 과 20
1. 혈청의 보존 조건에 따른 IgM의 영향 20
2. 사육수온에 따른 특이적 항체 반응 23
3. 능성어로부터 NNV에 대한 특이항체 검출 25
Ⅳ. 고 찰 27
제 3장 Poly(I:C)를 이용한 VNN 예방
Ⅰ. 서 론 30
Ⅱ. 재료 및 방법 32
1. 실험어 32
2. 바이러스 및 Poly(I:C) 32
3. Poly(I:C) 투여에 의한 VNN 예방 33
4. NNV 생존어를 대상으로 한 2차 감염 33
5. Poly(I:C) 투여에 의한 VNN 치료 33
5.1. 실험실 조건 33
5.2. 현장 조건 34
Ⅲ. 결 과 35
1. Poly(I:C)의 VNN 예방 효과 35
2. Poly(I:C)-면역법을 이용한 VNN 예방 35
3. Poly(I:C) 투여에 의한 VNN 치료 효과 38
Ⅳ. 고 찰 43
종합 고찰 46
참고문헌 51
Abstract 58

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