재조합 개 세포성장인자(EGF)의 분자생물학적 효능평가 :Molecular biological efficacy evaluation of recombinant canine epidermal growth factor(EGF)

김현정

자료유형: 학위논문

저자정보: 김현정 (한남대학교, 한남대학교 대학원)

지도교수: 김인섭

발행연도: 2015

저작권: 한남대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.

이용수8

초록· 키워드

상피세포 성장 인자(EGF)는 성장인자로서 상피세포 성장 인자 수용체에 결합하면 세포의 성장, 증식 그리고 분화를 촉진한다. EGF는 세포 표면에 있는 EGFR과 상호결합 하여 하나 이상의 세포내 신호전달을 활성화시킨다. 이런 신호전달은 표적유전자의 전사를 유도하기 위해 핵까지 특정한 반응으로 전달된다. 세포에 EGF를 처리하면 PI3K/AKT, RAS/ERK, 그리고 JAK/STAT 신호전달이 활성화 된다.
본 연구에서는 ㈜바이오프로젠이 생산한 cEGF의 생물학적 활성을 분자생물학적 방법으로 고찰하고자 하였다. 이를 위해 세포주로는 EGFR이 많이 존재하는 A-549 cell과 canine 세포주로 MDCK cell, 사람유래 keratinocyte 세포주인 Hacat cell을 사용하였다. 또한 개로부터 상피세포를 분리하여 사용하였다. 각 세포에 cEGF를 첨가하여 cell count 방법으로 세포의 증식속도를 비교하였고, cell migration assay 방법을 이용하여 세포의 증식 속도를 현미경으로 비교 관찰하였다. cEGF에 의해 활성화되는 신호전달기작을 확인하기 위해 EGF에 의해 활성화되는 단백질로 알려진 EGFR, AKT, ERK의 phospholation 정도를 western blot 방법으로 확인하였다. cEGF에 의해 각 세포주들과 개 상피세포의 성장속도가 증가함을 확인하였다. 또한 cEGF가 EGFR, AKT, ERK를 활성화시키는 것을 알 수 있었다.

Ⅰ. 서론 1
Ⅱ. 실험재료 및 방법 4
1. Canine Epidermal Growth Factor(cEGF) 4
2. cEGF 단백질 정량을 위한 Bradford assay 4
3. MDCK, A549, Hacat 세포 배양 4
4. Beagle Dog으로부터 Keratinocyte 분리 5
5. Cell count를 통한 세포증식 활성 측정 6
6. Migration assay를 통한 세포증식 활성 측정 7
7. Western Blot을 통한 생물학적 활성 측정 8
Ⅲ. 결과 10
1. Bradford assay를 이용한 cEGF 정량 10
2. cEGF에 의한 세포 증식 효과 12
3. cEGF에 의한 세포 이동 (migration) 효과 20
4. cEGF에 의해 촉진되는 Signal transduction 관련 단백질 분석 24
Ⅳ. 고찰 27
Ⅴ. 참고문헌 29
VI. Abstract 33
Ⅶ. 적요 35

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