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논문 기본 정보
- 자료유형
- 학위논문
- 저자정보
- 지도교수
- 김창길.
- 발행연도
- 2015
- 저작권
- 경북대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.
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초록· 키워드
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본 연구는 고온기의 국화 화색 탈색을 방지하기 위해 아그로박테리움 매개 형질전환 기술을 이용하여 안토시아닌 축적 유전자를 식물체 게놈상에 도입 및 안정적인 유전자 발현을 확인 하고자 하였다. 국내에서 육성된 스프레이 국화(Chrysanthemum morifolium)중 분홍색 계통의 ‘피치엔디’, 붉은색 계통의 ‘피치레드’ 그리고 주황색계통의 ‘비비드 스칼렛''을 실험재료로 이용하였다. 아그로박테리움 매개 형질전환과정에서 필수적인 요건 중 하나인 식물체 재분화의 효율을 향상시키기 위하여 엽조직 배양 시 배양일수, 암기처리기간에 따른 신초 재분화율을 확인한 결과 배양 60일째인 기내식물체를 초기 12일간 암기처리 했을 때 신초 재분화율이 가장 높은 것으로 나타났다. 아그로박테리움 형질전환을 통해 무(Raphanus sativus L.)에서 유래한 안토시아닌 축적 조절유전자인 RsMYB1 유전자를 국화로 도입한 결과, 총 38개체의 형질전환체를 얻을 수 있었다. 형질전환 효율은 ‘피치엔디’, ‘피치레드’, 그리고 ’비비드스칼렛‘에서 전신발현 프로모터인 CaMV 35S를 사용한 경우, 각각 0.9, 1.9, 0.9%, 꽃잎 특이적 발현 프로모터인 InMYB를 사용한 경우 각각 7.4, 5.6, 11.1%로 나타났다. southern hybridization을 통해 도입된 외래 유전자의 copy수를 확인하였으며, RT-PCR을 통해 도입된 유전자 및 안토시아닌 생합성 관련 유전자의 발현을 확인할 수 있었다. 안토시아닌의 축적은 줄기에서 발현이 확인이 되었지만 다른 조직에서는 나타나지 않았으며 추후 꽃잎 특이적 프로모터 하에서 조절되는 형질전환체에서 개화 후 화기조직에서의 안정적인 안토시아닌 발현을 확인해야 할 것으로 본다.
목차
- Abstract ⅰTable of contents ⅱList of tables ⅳList of figures ⅴIntroduction 1Materials and Methods 5Plant material 5Factors affecting regeneration efficiency of the chrysanthemum 5Effects of donor plant age 5Leaves stress assay 6Effect of dark treatment 7Screening of minimal concentration of DL-phosphinothricin (PPT) for shoot regeneration 8Experimental design and statistical analysis 9Plasmid construction and transformation 9Genetic analysis 12Herbicide resistance test 12DNA extraction and PCR(Polymerase Chain Reaction) analysis 13Southern hybridization 15RNA extraction and RT(Reverse-Transcription)-PCR 16Observation under stereoscopic microscopy 18Results and Discussion 19Effect of explant age on shoot regeneration 19DAB-H2O2 20Effect of dark treatment on shoot regeneration 21Screening of minimal concentration of PPT 23Agrobacteirum-mediated transformation ''Peach ND’ 24Expression of anthocyanin 27Agrobacteirum-mediated transformation ''Peach Red'' and ''Vivid Scarlet'' 30Genetic analysis 30References 37국문초록 43