Thiostrepton, a new drug candidate for Mycobacterium abscessus :

김규혜

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자료유형: 학위논문

저자정보: 김규혜 (경상국립대학교, Gyeongsang National University)

지도교수: Jiyun Yoo

발행연도: 2019

저작권: 경상국립대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.

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초록· 키워드

Mycobacterium abscessus는 병원성이 있고 다제내성이 강한 비결 핵균이다. 그러나 효과적인 약물이나 요법이 아직 보고되지 않고 있다. 따라서 M. abscessus에 대한 새롭고 효과적인 화합물의 개발이 시급히 필요하다. 본 연구에서는 M. abscessus-LuxG13에 대한 새로운 약제 후보 물질을 밝히기 위해 luminescence assays를 바탕으로 한국 화합물 은행
(Korean Chemical Bank ; KCB) library를 screen했다. KCB library는 KCB 대표 library, fragment library, kinase library, 천연물 및 임상 화합물과 같은 5 가지 유형으로 구성된다. 이러한 13,840개의 화합물이 M.abscessus-LuxG13에 대해 활성이 있는지 확인하기 위해 screen되었다. 90 %이상의 성장 저해를 보이는 122개의 유효물질들이 pilot 스크린에서 확인되었으며, M. abscessus-LuxG13에 대한 MIC (Minimum Inhibitory Concentration) 값이 luminescence assays에 의해 결정되었다. 이 논문은 ATCC 19977, 임상 분리 균주 및 약물 내성 돌연변이 M. abscessus의 성장을 억제할 수 있는 thiostrepton에 초점을 맞춘다. RAW 264.7 및 골 수유래 대식세포 (BMDM) 내에서 M. abscessus 성장률을 측정하였을 때 thiostrepton의 존재 하에서 유의미한 박테리아의 감소를 보였다. 또한 zebrafish와 mouse model의 감염을 이용한 생체 내 실험에서 thiostrepton은 dose-dependent 하게 M. abscessus의 생장을 억제하였다. 따라서 본 연구는 thiostrepton이 M. abscessus감염에 대한 치료제로서 새로운 항-M. abscessus 후보물질로의 가능성이 있음을 나타낸다.

Ⅰ. INTRODUCTION 1
Ⅱ. MATERIALS AND METHODS 4
1. Bacterial strains and culture 4
2. Plasmids and transformation 4
3. Assay validation and hit screen 4
4. Animal cell culture and viability assay 5
5. Determination of compounds activity against intracellular Mycobacterium abscessus 6
6. Minimal inhibitory concentration (MIC) determination using resazurin microtiter assay (REMA) 7
7. Drug inhibition of M. abscessus in bone marrow derived macrophages 8
8. Drug activity test in Danio rerio model (zebrafish) 8
9. In vivo efficacy of thiostrepton in murine model 11
Ⅲ. RESULTS AND DISCUSSION 13
1. Assay validation 13
2. Identification of Hits Active against M. abscessus-LuxG13 from a Korean Chemical Bank (KCB) library 15
3. MIC determination of thiostrepton against M. abscessus in vitro 18
4. Intracellular activity of thiostrepton against M. abscessus 23
5. Efficacy of thiostrepton in zebrafish and murine models 28
Ⅳ. REFERENCES 36

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