H₂O₂로 유발된 C6 신경교세포 사멸에 대한 총명공진단의 보호 효과 :Protective effects of ChongmyungGongjin-dan on H₂O₂-induced C6 glial cell death

황규상

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자료유형: 학위논문

저자정보: 황규상 (원광대학교, 圓光大學校)

지도교수: 愼鏞振

발행연도: 2020

저작권: 원광대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.

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총명공진단 (ChongmyungGongjin-dan; CMGJD)은 기억력, 인지기능 개선을 포함한 포괄적인 뇌기능 개선을 위해 補益强壯制인 供辰丹에 補心制인 聰明湯과 다른 여러 약재를 가미하여 조성되었다. 본 연구에서는 H2O2 처리로 산화 스트레스가 유발된 C6 신경교세포에서 CMGJD 추출물이 세포사멸 기전에 미치는 영향과 보호 효과를 확인하고자 하였다.
조성된 CMGJD은 증류수로 추출 후 농축과 동결건조를 거쳐 사용하였다. 먼저 허혈 환경에서 활성산소가 생성되며, 활성산소가 C6 신경교세포의 세포사멸을 일으킴을 형광염색법으로 확인하였다. 활성산소 제거능을 알아보기 위해 CMGJD 추출물 처리 전후 세포 형태 변화를 확인하였고, 활성산소종의 생성과 관련된 단백질의 발현을 확인하기 위해 western blot analysis로 HO-1과 Catalase 발현 변화를 관찰하였다. 활성산소종의 생성과 관련된 세포 소기관의 기능 변화를 확인하기 위해 형광염색 및 관련 효소의 발현량을 측정하였다.
그 결과, CMGJD 추출물은 활성산소종에 의한 세포 형태 변화를 억제하였고, 단백질 HO-1의 발현 증가와 Catalase 발현 감소를 억제하였다. 또한, 세포소기관 미토콘드리아의 막전위 손실을 억제하였으며, 리소좀 기능 장애를 억제하였고, 퍼록시좀의 양적 증가를 유도하였다.
따라서, CMGJD 추출물은 산화 스트레스에 의한 C6 신경교세포의 세포사멸 기전에 관여하여 보호 효과가 있는 것으로 나타났으며, 허혈성 뇌질환의 치료 및 예방에 응용이 가능할 것으로 생각된다.

Ⅰ. 緖論 1
Ⅱ. 實驗材料 및 方法 3
1. 재료 3
가. 세포주 3
나. 약재 3
다. 시약 및 기기 4
2. 방법 5
가. 시료의 제조 5
나. 세포주 배양 5
다. 세포생존율 측정 6
라. 세포 내 활성산소종 생성 측정: DCF-DA 형광염색 6
마. Western blot analysis 6
바. 미토콘드리아 기능 장애 측정: JC-1 형광염색 7
사. 리소좀 기능 장애 측정: Lysotracker 형광염색 8
아. 면역형광 염색(Immunofluorescence staining) 8
자. 지질대사체 변화량 조사: GC-MS 9
차. 통계처리 9
Ⅲ. 結果 10
1. H2O2가 C6 신경교세포의 생존율에 미치는 영향 10
2. 총명공진단이 H2O2에 의한 C6 신경교세포의 생존율에 미치는 영향 12
3. 총명공진단이 H2O2에 의한 C6 신경교세포의 형태학적 변화 및 세포사멸에 미치는 영향 14
4. 총명공진단의 H2O2에 의한 C6 신경교세포 사멸에서 활성산소종 제거 효과 16
5. 총명공진단이 H2O2에 의한 C6 신경교세포 사멸에서 HO-1 및 Catalase의 발현 변화에 미치는 영향 18
6. 총명공진단이 H2O2에 의한 C6 신경교세포 사멸에서 미토콘드리아의 기능 장애에 미치는 영향 20
7. 총명공진단이 H2O2에 의한 C6 신경교세포 사멸에서 리소좀의 기능 장애에 미치는 영향 22
8. 총명공진단이 H2O2에 의한 C6 신경교세포 사멸에서 오토파지에 미치는 영향 25
9. 총명공진단이 H2O2에 의한 C6 신경교세포 사멸에서 지질대사체 변화에 미치는 영향 27
10. 글루코스 및 혈청 결핍에 의한 허혈성 손상모델에서 C6 신경교세포의 생존율 및 활성산소종의 생성 변화 31
Ⅳ. 考察 33
Ⅴ. 結論 40

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