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논문 기본 정보
- 자료유형
- 학위논문
- 저자정보
- 지도교수
- 전사일
- 발행연도
- 2023
- 저작권
- 울산대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.
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서론: Treosulfan과 busulfan은 조혈모세포이식 전 컨디셔닝 요법으로 투여되는 약물로, 좁은 치료적 농도 범위와 환자간 큰 약동학적 변동성을 보여 약물 농도 감시가 필요한 약물이다. 본 연구에서는 treosulfan과 busulfan을 한번의 조건으로 동시에 측정할 수 있는 액체 크로마토그래피 텐덤 질량분석 방법을 개발하고 검증하였다.
방법: 보정물질 및 내부정도관리 물질을 준비하기 위해 treosulfan의 전구약물과 대사물질(S,S-EBDM) 및 busulfan에 대한 상품화된 참조표준물질을 이용했다. 내부표준물질(internal standard, IS)로는 동위 원소인 teosulfan-D4 및 busulfan-D8을 사용하였다. 25 μL의 혈장을 IS이 포함된 아세토니트릴로 단백질 침전 후 분석물을 분리했다. 원심분리 후, 상층액을 3% 포름산으로 희석하였다. ACQUITY I-Class plus ultra 시스템을 사용하여 크로마토그래피 분리를 수행하고, 양이온 전기분무 이온화 모드에서 작동하는 XEVO TQ-XS 질량분석기로 분석하였다. 분석물질과 IS는 다중 반응 모니터링(multiple reaction monitoring, MRM) 모드에서 검출하였다. 검출 한계, 정량 한계, 선택성, 직선성, 정확도, 정밀도, 잔효, 기질 효과 및 검체 안정성을 CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute)지침에 따라 검증하였다.
결과: 분석물질의 LC 머무름 시간은 treosulfan의 경우 전구약물 0.44분, 대사물질 0.43분 그리고 IS는 0.44분이었으며, busulfan의 경우 1.20분, IS는 1.18분이었다. MRM 모드에서 정량화에 사용된 질량 대 전하 비(m/z) 전이는 다음과 같다: treosulfan 전구약물 296.2 > 87.1; 대사물질 200.2 > 87.1; 및 busulfan 264.1 > 55.1. 총 실행 시간은 4분이었다. Treosulfan의 전구약물과 대사물질 및 busulfan의 검출 한계는 각각 0.21, 0.23 및 0.001 µg/mL이었다. Treosulfan의 전구약물과 대사물질 및 busulfan 각각 3.13–100 µg/mL, 0.63–5.00 µg/mL및 0.16–5.00 µg/mL의 농도에 걸쳐 직선성을 보였다. 정밀도는 treosulfan의 대사물질을 제외하고 검증 기준을 충족했다. 이 방법은 선택적이고 정확했으며 잔효가 없었다. Treosulfan 전구약물 및 busulfan의 기질 효과는 허용가능범위 이내였으나 treosulfan의 대사물질은 기질 효과를 배제할 수 없었다. Busulfan과 treosulfan은 실온에서 2시간 동안 혈장 내에서 안정적이었다. 검체를 냉장 보관 시 busulfan은 일주일까지, treosulfan은 3일까지 안정하였으며, 냉동 보관시에는 두 물질 모두 일주일까지 안정하였다.
결론: LC-MS/MS를 이용하여 개발한 treosulfan과 busulfan 동시 측정법은 CLSI 지침의 검증 요구 사항을 충족하였다. 이 방법은 treosulfan 또는 busulfan 치료 후에 임상검사실에서 약물 농도 모니터링 검사를 실행하는데 적절할 것으로 기대된다.
방법: 보정물질 및 내부정도관리 물질을 준비하기 위해 treosulfan의 전구약물과 대사물질(S,S-EBDM) 및 busulfan에 대한 상품화된 참조표준물질을 이용했다. 내부표준물질(internal standard, IS)로는 동위 원소인 teosulfan-D4 및 busulfan-D8을 사용하였다. 25 μL의 혈장을 IS이 포함된 아세토니트릴로 단백질 침전 후 분석물을 분리했다. 원심분리 후, 상층액을 3% 포름산으로 희석하였다. ACQUITY I-Class plus ultra 시스템을 사용하여 크로마토그래피 분리를 수행하고, 양이온 전기분무 이온화 모드에서 작동하는 XEVO TQ-XS 질량분석기로 분석하였다. 분석물질과 IS는 다중 반응 모니터링(multiple reaction monitoring, MRM) 모드에서 검출하였다. 검출 한계, 정량 한계, 선택성, 직선성, 정확도, 정밀도, 잔효, 기질 효과 및 검체 안정성을 CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute)지침에 따라 검증하였다.
결과: 분석물질의 LC 머무름 시간은 treosulfan의 경우 전구약물 0.44분, 대사물질 0.43분 그리고 IS는 0.44분이었으며, busulfan의 경우 1.20분, IS는 1.18분이었다. MRM 모드에서 정량화에 사용된 질량 대 전하 비(m/z) 전이는 다음과 같다: treosulfan 전구약물 296.2 > 87.1; 대사물질 200.2 > 87.1; 및 busulfan 264.1 > 55.1. 총 실행 시간은 4분이었다. Treosulfan의 전구약물과 대사물질 및 busulfan의 검출 한계는 각각 0.21, 0.23 및 0.001 µg/mL이었다. Treosulfan의 전구약물과 대사물질 및 busulfan 각각 3.13–100 µg/mL, 0.63–5.00 µg/mL및 0.16–5.00 µg/mL의 농도에 걸쳐 직선성을 보였다. 정밀도는 treosulfan의 대사물질을 제외하고 검증 기준을 충족했다. 이 방법은 선택적이고 정확했으며 잔효가 없었다. Treosulfan 전구약물 및 busulfan의 기질 효과는 허용가능범위 이내였으나 treosulfan의 대사물질은 기질 효과를 배제할 수 없었다. Busulfan과 treosulfan은 실온에서 2시간 동안 혈장 내에서 안정적이었다. 검체를 냉장 보관 시 busulfan은 일주일까지, treosulfan은 3일까지 안정하였으며, 냉동 보관시에는 두 물질 모두 일주일까지 안정하였다.
결론: LC-MS/MS를 이용하여 개발한 treosulfan과 busulfan 동시 측정법은 CLSI 지침의 검증 요구 사항을 충족하였다. 이 방법은 treosulfan 또는 busulfan 치료 후에 임상검사실에서 약물 농도 모니터링 검사를 실행하는데 적절할 것으로 기대된다.
목차
- 목차국문 요약 i목차 iii표 목차 iv그림 목차 v서론 1연구방법1. 검사법 개발1.1. 시약 61.2. 내부표준물질 보정물질 및 내부정도관리 물질 71.3. 시료 전처리 91.4. LC 조건 101.5. MS/MS 조건 132. 검사법 검증 153. 통계분석 19결과1. 검사법 개발1.1. LC 분석 201.2. MS/MS 분석 222. 검증 결과 25고찰 35참고문헌 44영문 요약 48
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