Kakugo Virus(KV)는 외관상으로는 건강하지만 공격적인 성향을 나타내는 일벌의 뇌에서 분리된 picorna virus 계열의 virus이다. 본 연구에서는 양봉 현장에서의 신속한 KV의 진단을 위하여 loopmediated isothermal amplification법을 이용하여 KV를 검출 가능한 진단법을 개발하였으며, 이를 KV-LAMP(s)라 명명하였다. 이 방법은 기존의 KVLAMP보다 20분 빠르게 진단할 수 있는 장점이 있다. KV의 특이적인 염기서열에 근거한 KV-F3(2) / B3(2) / FIP(2) / BIP(2), 4개의 primer를 사용하여 56°C의 등온조건하에서 40분간 정치하여 KV의 DNA가 1×102copies/μl 까지 성공적으로 증폭됨을 확인하였다. SYBR GreenⅠ과 Gene-Finder™ Nucleic acid fluorescent dye를 사용하여 전기영동없이 육안으로 관찰할 수 있었다. 따라서 KVLAMP(s)법은 KV를 신속하고 정확하게 검출함으로써 양봉현장에서 유용하게 적용될 수 있을 것으로 판단된다.
Kakugo Virus (KV) is a picorna-like virus that was originally identified in the brains of aggressive but apparently healthy worker honeybees (Apis mellifera L.). A loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay allows one-step detection of gene amplification without expensive equipment such as thermocycler. In this study, new LAMP method for the specific detection of KV in honeybee was developed (KV-LAMP(s)). This method have an advantage that 20 minutes faster than previously KVLAMP. A set of four designed primers named KV-F3(2) / B3(2) / FIP(2) / BIP(2) that recognize KV sepcific sequence. After optimization of conditions, KV-LAMP(s) specific amplification was successfully performed using KV-LAMP(s) from standard DNA sequence. KV-specific template was amplified under isothermal conditions at 56°C within 40 minutes by KV-LAMP(s). The method could be detected KV from DNA clone at 1×102copies/μl. Especially, this method was developed direct detection by using SYBR GreenⅠ and Gene-FinderTM? Nucleic acid fluorescent dye. In conclusion, KV-LAMP(s) may be a useful method for the detection Kakugo Virus from the field.