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선행연구에서 카스파제-3 효소가 DEVD 기질을 완전히 절단하는 반면 IETD 기질은 DEVD의 약 50%정도만을 부분적으로 분해한다는 사실을 보고하였다. 본 연구에서는 정제된 폴리-단백질이 카스파제-3 단백질 분해효소의 기질에 따른 차별적인 분해활성에 의해 프로세싱 되는 양상을 분석하였다. 모델 단백질로서 GST, MBP, RFP 세 종류의 단백질을 DEVD 및 IETD 펩타이드로 연결시킨 폴리-단백질을 제작하였으며, 폴리-단백질은C-말단에 6개의 히스티딘 태그가 결합되도록 클로닝 되었다. IMAC 크로마토그래피를 이용하여 분리 및 정제된 재조합 단백질은 SDS-PAGE 분석을 통해 분자량이 약 93 kDa으로 나타났으며, 카스파제-3 효소의 처리에 의해 각각 MBP:RFP, MBP 그리고 GST 3종류의 단백질 절편으로 절단 및 분리되었다. 이 연구를 통해 단백질 분해효소와 기질 간의 반응성의 차이를 이용하여 폴리-단백질을 정량적으로 프로세싱 할 수 있다는 예를 보여주었다.
목차
Introduction
Materials and methods
Results and Discussion
References
초록
참고문헌 (13)
참고문헌 신청
1. [학술지(정기간행물)] - Goldbach, R. / 1990 / Plant viral proteinases / Sem. Virol 1 : 335 ~ 346
2. [학술지(정기간행물)] - Jacobson, M. F. / 1968 / Polypeptide cleavages in the formation of poliovirus proteins / Proc. Natl. Acad. Sci, USA 61 : 77 ~ 84
3. [학술지(정기간행물)] - Krausslich, H. G. / 1988 / Viral proteinases / Annu. Rev. Biochem 57 : 701 ~ 754
4. [학술지(정기간행물)] - Mitchell, D. A. / 2005 / Thioredoxin catalyzes the S-nitrosation of the caspase-3 active site cysteine / Nat. Chem. Biol 1 : 154 ~ 158
5. [학술지(정기간행물)] - Oh, Y. / 2015 / Applications of animal biosensors : a review / IEEE Sens. J 15 : 637 ~ 645
2. [학술지(정기간행물)] - Jacobson, M. F. / 1968 / Polypeptide cleavages in the formation of poliovirus proteins / Proc. Natl. Acad. Sci, USA 61 : 77 ~ 84
3. [학술지(정기간행물)] - Krausslich, H. G. / 1988 / Viral proteinases / Annu. Rev. Biochem 57 : 701 ~ 754
4. [학술지(정기간행물)] - Mitchell, D. A. / 2005 / Thioredoxin catalyzes the S-nitrosation of the caspase-3 active site cysteine / Nat. Chem. Biol 1 : 154 ~ 158
5. [학술지(정기간행물)] - Oh, Y. / 2015 / Applications of animal biosensors : a review / IEEE Sens. J 15 : 637 ~ 645
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