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From a genomic library of Lactobacillus reuteriATCC 55739, one clone, NE347, carrying a pyrH geneencoding UMP kinase, was identified. pNE347 carried a 1.88 kbEcoRI fragment and the pyrH was located in the middle of theinsert. pyrH ORF was 723 bp in size and capable of encodingUMP kinase composed of 240 amino acid residues. tsfencoding an elongation factor-Ts and frr encoding a ribosomalrecycling factor were present upstream and downstream ofpyrH, respectively. When introduced into E. coli KUR1244, apyrH-negative strain, pNE347 restored the ability to grow at42oC, indicating that pyrH from L. reuteri synthesized functionalUMP kinase in E. coli. Northern blot experiment showed thatpyrH and frr were cotranscribed as a 1.4 kb single transcript.pyrH was overexpressed in E. coli by using a pET26b(+)vector, and a major 25 kDa protein band appeared on SDSpolyacrylamidegel.

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