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논문 기본 정보

자료유형
학술저널
저자정보
저널정보
한국미생물생명공학회 Journal of Microbiology and Biotechnology Journal of Microbiology and Biotechnology 제27권 제8호
발행연도
2017.1
수록면
1,461 - 1,471 (11page)

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Escherichia coli heat-labile enterotoxin (LT) and its non-toxic mutant (LTm) are well-known powerful mucosal adjuvants and immunogens. However, the yields of these adjuvants from genetically engineered strains remain at extremely low levels, thereby hindering their extensive application in fundamental and clinical research. Therefore, efficient production of these adjuvant proteins from genetically engineered microbes is a huge challenge in the field of molecular biology. In order to explore the expression bottlenecks of LTm in E. coli, we constructed a series of recombinant plasmids based on various considerations and gene expression strategies. After comparing the protein expression among strains containing different recombinant plasmids, the signal sequence was found to be critical for the expression of LTm and its subunits. When the signal sequence was present, the strong hydrophobicity and instability of this amino acid sequence greatly restricted the generation of subunits. However, when the signal sequence was removed, abundantly expressed subunits formed inactive inclusion bodies that could not be assembled into the hexameric native form, although the inclusion body subunits could be refolded and the biological activity recovered in vitro. Therefore, the dilemma choice of signal sequence formed bottlenecks in the expression of LTm. These results reveal the expression bottlenecks of LTm, provide guidance for the preparation of LTm and its subunits, and certainly help to promote efficient preparation of this mucosal adjuvant protein.
#Mucosal adjuvant LTm #AB5-hexamer protein #expression bottlenecks #preparation strategies #genetic engineering

목차

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Davtyan H / 2014 / Immunostimulant patches containing Escherichia coli LT enhance immune responses to DNA- and recombinant protein-based Alzheimer’s disease vaccines / J. N google schola El-Kamary SS / 2013 / Safety and immunogenicity of a single oral dose of recombinant double mutant heatlabile toxin derived from enterotoxigenic Escherichia coli / Clin. Vac google schola Fingerut E / 2005 / Vaccine and adjuvant activity of recombinant subunit B of E. coli enterotoxin produced in yeast / Vaccine 23 : 4685 ~ 4696 google schola Hegde A / 2009 / Effect of stress on production of heat labile enterotoxin by Escherichia coli / Indian J. Med. Microbiol 27 : 325 ~ 328 google schola Hofstra H / 1985 / Heat-labile enterotoxin in Escherichia coli. Kinetics of association of subunits into periplasmic holotoxin / J. Biol. Chem 260 : 16037 ~ 16044 google schola

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