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Mouse thymosin β-4 (TB4) 유전자를 Escherichia coli에서 intein-tag 융합 단백질로 발현시키고 정제하였다. 재조합 TB4-intein 융합 단백질의 분자량을 10% glycine SDS-PAGE로 확인한 결과, 세포내 soluble 분획에서 60 kDa의 단백질을 얻을 수 있었고, 유도발현 최적 조건은 0.1 mM IPTG, 25℃에서 3시간 동안 유도 발현할 때가 최적임을 확인하였다. TB4 만을 얻기 위해서 유도발현된 TB4-intein을 DTT를 이용해 self-cleavage를 일으킨 다음, chitin bead를 이용한 친화성 크로마토그라피로 정제 후 분자량을 확인 한 결과, 5 kDa으로 확인되었으며, 순도는 95% 이상 이었다. 정제한 recombinant TB4가 생물학적 기능을 보유하고 있는지 확인을 하기 위하여, TB4를 농도 별(1~1,000 ng/ml)로 하여 HT1080 cell을 이용한 cell migration을 측정한 결과, 모든 농도에서 recombinant TB4가 화학합성한 TB4 보다 약 20% 이상 높은 활성을 보였으며, recombinant TB4 1 ng/ml의 농도에서 cell migration 활성이 가장 높게 나타났다. Recombinant TB4를 마우스 상처 부위에 5일 동안 매일 처리한 결과(최종 처리 농도 0.5 mg/ml), 화학합성 TB4 보다 recombinant TB4의 상처치유 활성이 약 35% 더 높음을 알 수 있었다. 이상의 결과는 recombinant TB4가 화학합성 TB4보다 cell migration과 상처치유에 훨씬 높은 활성을 나타냄을 보여주고 있다.
목차
서론
재료 및 방법
결과 및 고찰
결론
References
초록
참고문헌 (31)
참고문헌 신청
Belsky, J. B., Rivers, E. P., Filbin, M. R., Lee, P. J. and Morris, D. C. 2018. Thymosin beta 4 regulation of actin in sepsis. Expert Opin. Biol. Ther. 18, 193-197.
Bock-Marquette, I., Saxena, A., White, M. D., DiMaio, J. M. and Srivastava, D. 2004. Thymosin β4 activates integrinlinked kinase and promotes cardiac cell migration, survival and cardiac repair. Nature 432, 466-472.
Carpintero, P., Anadon, R., Dı́az-Regueira, S. and Gomez-Marquez, J. 1999. Expression of thymosin β 4 messenger RNA in normal and kainate-treated rat forebrain. Neuroscience 90, 1433-1444.
Cha, H. J., Jeong, M. J. and Kleinman, H. K. 2003. Role of thymosin β4 in tumor metastasis and angiogenesis. J. Natl. Cancer Inst. 95, 1674-1680.
Dai, B., Sha, R. N., Yuan, J. L. and Liu, D. J. 2021. Multiple potential roles of thymosin β4 in the growth and development of hair follicles. J. Cell Mol. Med. 25, 1350-1358.
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Dai, B., Sha, R. N., Yuan, J. L. and Liu, D. J. 2021. Multiple potential roles of thymosin β4 in the growth and development of hair follicles. J. Cell Mol. Med. 25, 1350-1358.
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