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자료유형
학술저널
저자정보
Chhabra Gautam (School of Agricultural Biotechnology, Punjab Agricultural Biotechnology, Ludhiana, India) Sharma Manveer (School of Agricultural Biotechnology, Punjab Agricultural Biotechnology, Ludhiana, India) Kalia Anu (Electron Microscopy and Nanoscience Laboratory, Department of Soil Science, College of Agriculture, Punjab Agricultural University, Ludhiana, India) Kaur Ajinder (School of Agricultural Biotechnology, Punjab Agricultural Biotechnology, Ludhiana, India) Sandhu Jagdeep Singh (School of Agricultural Biotechnology, Punjab Agricultural Biotechnology, Ludhiana, India)
저널정보
한국식물생명공학회 Plant Biotechnology Reports Plant Biotechnology Reports Vol.18 No.4
발행연도
2024.8
수록면
497 - 506 (10page)
DOI
10.1007/s11816-023-00877-y

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Citrus spp. are recalcitrant to in vitro shoot regeneration and we report an improved in planta protocol for genetic transforma- tion of rough lemon that bypasses shoot regeneration in tissue culture. The features of the protocol were the use of an Agro - bacterium suspension with an OD600 nm = 0.6–1.0 supplemented with 100 μg acetosyringone, gentle shaking of embryo axes pricked at shoot apical meristems (from 2-day-old germinating seeds) at 70 rpm during agro-infection, followed by growth and development of plantlets at 30 °C. PCR screening of 2-month-old T plants revealed the presence of an amplicon cor- 0 responding to the β-1,3-glucanase gene in the primary branches of 25 plants with a transformation efciency of 7.74%. PCR analysis of the secondary branches of these plants after 18 months showed chimerism, i.e., the coexistence of transformed and untransformed branches in all 25 plants. Quantifcation of β-1,3-glucanase expression in the transformed secondary branches by qRT-PCR showed that plant number 32 had maximum (3.71-fold) relative transgene expression. The qRT-PCR analysis of all four tertiary branches arising from the transformed secondary branch of plant number 32 showed no signif- cant diferences in expression among themselves and from the transformed secondary branch, suggesting restoration of the transformed branches with uniform expression and dissociation of chimerism. Scanning electron microscopy examination of leaves from secondary and tertiary branches that uniformly expressed the transgene showed a smooth, waxy surface with non-signifcant variation in stomata, which had a narrow opening and a mean pore length of 4.22 ± 0.25–5.09 ± 0.36 µm. In contrast, the leaves of untransformed branch had a rough surface and a signifcantly large stomatal opening with a mean pore length of 7.82 ± 0.67 µm. The micro-morphological characteristics of the leaves confrmed the dissociation of chimerism in the transformed tertiary branches of plant number 32. The study demonstrates identifcation of chimerism after in planta transformation using PCR technique, and the novelty relates to monitoring dissociation of chimerism in transformed tertiary branches of T generation using qRT-PCR analysis and its corroboration by electron microscopy. The protocol for genetic 0 transformation in plants described in the present study can be used for trait improvement by transgenesis.

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