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저널정보
한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 한국미생물·생명공학회지 제33권 제4호
발행연도
2005.1
수록면
260 - 266 (7page)

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본 실험에서는 HRF가 다량 존재하는 RBL-2H3 세포주에다양한 PKC isotype별 억제제를 처리하여 in vitro상에서Na,K-ATPase α1L3를 이용한 pull-down assay와 RBL-2H3세포를 이용한 membrane fractionation을 실시하였다. 그 결과 HRF는 in vitro에서 α1L3와 결합한다는 사실을 재확인할 수 있었고 실제 세포주 내에서 Na,K-ATPase와 결합한다는 것을 알 수 있었다. 사용한 약물로부터 PKC α, β, δ 뿐아니라 protein phosphatase 2B(PP2B)도 HRF와 α1L3의결합에 관여한다는 사실을 알 수 있었다. 또한 이들 PKC,Fig. 3. Interaction of HRF and Na,K-ATPase confirmed by immunoprecipitation in Cos-7 cells. Cos-7 cells were transfected withrecombinant Hemagglutinin tagged HRF constructs using Lipofectamine reagent. The HRF transfected Cos-7 cells were lysed in hypotonicbuffer. Whole cell extracts were incubated with anti-Hemagglutinin antibody and protein A agarose bead suspension. The bound proteinswere eluted by boiling with sample buffer and analyzed using anti-Na,K-ATPase antibody. (A) Na,K-ATPase was detected in crudeextracts. (B) Immunoprecipitates were detected with anti-Na,K-ATPase antibody. 1: purified Na,K-ATPase, 2: Marker, 3: Mock, 4: Control,5: PMA, 6: PMA (L), 7: Go6976, 8: Rott, 9: OkA, 10: CsA.Fig. 4. Histamine release assay. RBL-2H3 cells cultured in 24well plate were treated with the indicated drugs after serumstarvation. The level of histamine in supernatants of drug treatedcells were mesured. RBL-2H3 cells treated indicated drugs withoutIgE showed that their spontaneous histamine releasing wereeffected by some drugs itself.266 SOHN AND LEEPP2B에 의해 인산화된 HRF 분자는 cytosolic fraction으로이행할 수 있으며 이러한 결과는 탈인산화된 HRF가 Na,KATPase와결합하여 Na,K-ATPase의 기능을 조절한다고 추정할 수 있다. 그러나 약물자체가 histamine 분비에 영향을미칠 수 있으며 cytosolic HRF보다 exocytosis된 HRF가histamine를 더 분비하도록 할 수 있으므로, 약물을 전처리한 세포에 외부에서 HRF를 첨가하여 histamine이 유리되는정도가 어떻게 변화하는지를 HRF를 가하지 않은 결과와 비교해야 할 것이다.
#HRF #Na #K-ATPase #PKC α #PKC β #PKC δ

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/ 1981 / Effects of calcium antagonists on human basophilhistamine release immu (l) google schola / 1983 / Calcium channel blockers in immediate hypersensitivity google schola / 1987 / Effects ofnifedipine on histamine release from human basophilleucocytes : 298 ~ 42 304 google schola / 1987 / Studies of IgE-dependent histamine releasing factors heterogenecity of IgE immu (l) : 506 ~ 512 google schola / 1988 / Nucleotide sequence of a majormessenger RNA for a 21 kilodalton polypeptide that is undertranslational control in mouse tumor cells google schola

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