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Peroxidasin (PXDN)은 촉매 도메인 외에도 세포외기질 모티프를 포함한 다양한 도메인을 가진 heme peroxidase로서, collagen IV (Col IV)에서 sulfilimine 가교를 형성하여 Col IV의 스캐폴드를 강화한다. 우리는 이전 논문에서 PXDN이 sulfilimine 가교 의존적인 기질 assembly를 통하여 내피세포 생존 및 성장 신호전달에 필요하다고 보고하였다. 이 연구에서는 내피세포에서의 PXDN 기능에 있어 peroxidase 활성의 필요성을 조사하였다. 첫번째로 peroxidase 도메인의 활성 부위에 존재하며 고도로 보존된 Q823과 D826을 각각 W823, E826으로 치환한 돌연변이체를 제작하였다. 이러한 돌연변이 단백질을 높게 발현하는 HEK293 클론을 분리하였고, 이들 세포를 무혈청 배지에서 24시간 배양하여 조건 배지를 확보하여 평가하였다. 조건배지에 대해 비환원 조건으로 Western blot 분석을 실시하였을 때, 돌연변이 단백질은 삼량체를 형성하는 것으로 관찰되었고, proprotein convertase에 의해 야생형 PXDN처럼 절단되는 것을 확인하였다. 그러나, peroxidase활성은 돌연변이 PXDN이 포함된 조건 배지에서 야생형 PXDN과는 대조적으로 관찰되지 않았다. 또한, sulfilimine 가교 형성 능력도 돌연변이 PXDN에서 소실되었음이 확인되었다. 이에 더하여, PXDN이 depletion된 내피세포에 돌연변이 PXDN이 포함된 조건배지를 가하였을 때, 야생형 PXDN 조건배지와 달리 증식을 촉진시키지 못함을 관찰하였다. 이러한 결과들은 PXDN의 peroxidase 활성이 sulfilimine 가교를 형성하여 내피세포 성장에 영향을 미침을 제안한다.
목차
Introduction
Materials and Methods
Results and Discussion
References
초록
참고문헌 (25)
참고문헌 신청
Bhave, G., Cummings, C. F., Vanacore, R. M., Kumagai-Cresse, C., Ero-Tolliver, I. A., Rafi, M., Kang, J. S., Pedchenko, V., Fessler, L. I., Fessler, J. H. and Hudson, B. G. 2012. Peroxidasin forms sulfilimine chemical bonds using hypohalous acids in tissu
Cheng, G., Li, H., Cao, Z., Qiu, X., McCormick, S., Thannickal, V. J. and Nauseef, W. M. 2011. Vascular peroxidase-1 is rapidly secreted, circulates in plasma, and supports dityrosine cross-linking reactions. Free Radic. Biol. Med. 51, 1445-1453.
Cheng, G., Salerno, J. C., Cao, Z., Pagano, P. J. and Lambeth, J. D. 2008. Identification and characterization of VPO1, a new animal heme-containing peroxidase. Free Radic. Biol. Med. 45, 1682-1694.
Colon, S. and Bhave, G. 2016. Proprotein Convertase processing enhances Peroxidasin activity to reinforce Collagen IV. J. Biol. Chem. 291, 24009-24016.
Ero-Tolliver, I. A., Hudson, B. G. and Bhave, G. 2015. The ancient immunoglobulin domains of Peroxidasin are required to form sulfilimine cross-links in collagen IV. J. Biol. Chem. 290, 21741-21748.
Cheng, G., Li, H., Cao, Z., Qiu, X., McCormick, S., Thannickal, V. J. and Nauseef, W. M. 2011. Vascular peroxidase-1 is rapidly secreted, circulates in plasma, and supports dityrosine cross-linking reactions. Free Radic. Biol. Med. 51, 1445-1453.
Cheng, G., Salerno, J. C., Cao, Z., Pagano, P. J. and Lambeth, J. D. 2008. Identification and characterization of VPO1, a new animal heme-containing peroxidase. Free Radic. Biol. Med. 45, 1682-1694.
Colon, S. and Bhave, G. 2016. Proprotein Convertase processing enhances Peroxidasin activity to reinforce Collagen IV. J. Biol. Chem. 291, 24009-24016.
Ero-Tolliver, I. A., Hudson, B. G. and Bhave, G. 2015. The ancient immunoglobulin domains of Peroxidasin are required to form sulfilimine cross-links in collagen IV. J. Biol. Chem. 290, 21741-21748.
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