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저널정보
한국미생물생명공학회 Journal of Microbiology and Biotechnology Journal of Microbiology and Biotechnology 제14권 제3호
발행연도
2004.1
수록면
584 - 592 (9page)

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A thermostable b-glycosidase gene, tfi b-gly, wascloned from the genomic library of Thermus filiformis Wai33A1. tfi b-gly consists of 1,296 bp nucleotide sequence andencodes a polypeptide of 431 amino acids. It shares a strongamino acid sequence similarity with the b-glycosidases from otherThermus spp. belonging to the glycosyl hydrolase family 1. Inthe present study, the enzyme was overexpressed in Escherichiacoli BL21 (DE3) using the pET21b(+) vector system. Therecombinant enzyme was purified to homogeneity by heattreatment and a Ni2+-affinity chromatography. Polyacrylamidegel electrophoresis (PAGE) showed that the recombinant Tfib-glycosidase was a monomeric form with molecular mass of49 kDa. The temperature and pH range for optimal activity ofthe purified enzyme were 80- 90oC and 5.0- 6.0, respectively.Ninety-three percent of the enzyme activity was remained at70oC after 12 h, and its half-life at 80oC was 6 h, indicatingthat Tfi b-glycosidase is highly thermostable. Based on its Kmor Kcat/Km ratio, Tfi b-glycosidase appeared to have higheraffinity for b-D-glucoside than for b-D-galactoside, however,Kcat for b-D-galactoside was much higher than that for b-Dglucoside.The activity for lactose hydrolysis was proportionallyincreased at 70oC and pH 7.0 without substrate inhibition untilreaching 250 mM lactose concentration. The specific activityof Tfi b-glycosidase on 138mM lactose at 70oC and pH 7.0 was134.9 U/mg. Consequently, this newly cloned enzyme appearsto have a valuable advantage of conducting biotechnologicalprocesses at elevated temperature during milk pasteurizationin the production of low-lactose milk.
#b-Glycosidase #Thermus filiformis Wai33 A1 #lactose hydrolysis #low-lactose milkLactase deficiency is one of the most common geneticdisorders afflicting more than 50% of the world's populationand often causes lactose intolerance [6]. Lactose-intolera

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참고문헌 (22)

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/ 1961 / A procedure for the isolation ofdeoxyribonucleic acid from micro-organisms : 208 ~ 218 google schola Bauer / 1998 / The family 1 b-glucosidases from Pyrococcus furiosus and Agrobacteriumfaecalis share a common catalytic mechanism 37 : 17170 ~ 17178 google schola Bollag, D. M / 1996 / Protein Methods, 2nd Ed google schola Brent / 1993 / CurrentProtocols in Molecular Biology google schola Colas,B / 1980 / Kinetic studies on b-fucosidases of Achatinabalteata acta 613 : 448 ~ 458 google schola

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