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D-Xylulose는 nonoxidative pentose phosphate 경로를 통해 glycolysis 과정으로 들어가기 전에 D-xylulose kinase에 의해서 D-xylulose-5-phosphate로 인산화 된다. K. gwangalliensis strain SJ2로부터 D-xylulose kinase(XK)를 암호화하는 유전자는 E. coli를 이용하여 서열분석 및 발현 하였으며, XK 유전자의 염기서열 1,419 bp로 구성되어 있으며 463개의 아미노산 잔기를 암호화하고 있다. 분석결과를 통해 XK 유전자가 진화과정 동안 잘 보존되었음을 보여 주었다. XK 유전자의 발현을 위해 pCold-II 발현 벡터에 클로닝 하였으며 클로닝 된 플라스미드는 E. coli strain BL21 (DE3)에 형질전환 하여 IPTG를 이용해 발현을 유도하였다. 재조합 된 XK 단백질의 크기는 약 48 kDa이었다. 이 발현된 단백질은 affinity chromatography를 이용하여 정제하였으며 D-xylulose kinase에 따른 enzymatic activity를 분석하였다. D-xylulose와 ATP로 실행한 XK enzyme kinetic 연구는 각각 250±20 μM과 1,300±50 μM의 Km value를 보였다. 본 연구를 통해 얻어진 결과는 분자적 수준에서 D-xylulose kinase의 특성 연구의 보다 넓은 지식적 기초를 제공할 것으로 사료된다.
목차
Introduction
Materials and Methods
Results and Discussion
References
초록
참고문헌 (13)
참고문헌 신청
1. [학술지(정기간행물)] - Deng, X. X. / 1990 / Xylulokinase Activity in various yeasts including Saccharomyces cerevisiae containing the cloned Xylulokinase gene / Appl. Biochem. Biotech 24 : 193 ~ 199
2. [학술지(정기간행물)] - Flanagan, T. / 1992 / Purification and characterization of D-xylulokinase from the pentose-fermenting yeast Pichia stipidis NCYC 1541 / Enzyme Microb. Technol 14 : 975 ~ 979
3. [학술지(정기간행물)] - Ho, N. W. Y. / 1989 / Cloning of yeast Xylulokinase gene by complementation of E. coli and yeast mutations / Enzyme Microb. Technol 11 : 417 ~ 421
4. [학술지(정기간행물)] - Johansson, B. / 2001 / Xylulokinase overexpression in two strains of Saccharomyces cerevisiae also expressing xylose reductase and xylitol dehydrogenase and its effect on fermentation of xylose and lignocellulosic hydrolysate / Appl. Environ. Microbiol 67 : 4249 ~ 4255
5. [학술지(정기간행물)] - Lawlis, V. B. / 1984 / Cloning and Sequencing of the Xylose Isomerase and Xylulose Kinase genes of Escherichia coli / Appl. Environ. Microbiol 47 : 15 ~ 21
2. [학술지(정기간행물)] - Flanagan, T. / 1992 / Purification and characterization of D-xylulokinase from the pentose-fermenting yeast Pichia stipidis NCYC 1541 / Enzyme Microb. Technol 14 : 975 ~ 979
3. [학술지(정기간행물)] - Ho, N. W. Y. / 1989 / Cloning of yeast Xylulokinase gene by complementation of E. coli and yeast mutations / Enzyme Microb. Technol 11 : 417 ~ 421
4. [학술지(정기간행물)] - Johansson, B. / 2001 / Xylulokinase overexpression in two strains of Saccharomyces cerevisiae also expressing xylose reductase and xylitol dehydrogenase and its effect on fermentation of xylose and lignocellulosic hydrolysate / Appl. Environ. Microbiol 67 : 4249 ~ 4255
5. [학술지(정기간행물)] - Lawlis, V. B. / 1984 / Cloning and Sequencing of the Xylose Isomerase and Xylulose Kinase genes of Escherichia coli / Appl. Environ. Microbiol 47 : 15 ~ 21
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